Что такое пцр анализ


ПЦР-анализ: что это такое, когда он назначается и как проводится

Высокотехнологичные лабораторные методы диагностики дают возможность выявить множество заболеваний на самых ранних стадиях. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) — один из самых новых и точных способов диагностики. За его разработку ученый Кэри Муллис получил в 1993 году Нобелевскую премию. Сегодня этот метод хотя и считается экспериментальным, но уже широко и успешно применяется в медицине.

ПЦР-диагностика: суть подхода

Метод ПЦР использует принципы молекулярной биологии. Его суть заключается в применении особых ферментов, которые многократно копируют фрагменты РНК и ДНК возбудителей болезни, которые находятся в пробах биоматериала, например в крови.

После этого работники лаборатории сверяют полученные фрагменты с базой данных, выявляют тип возбудителя болезни и его концентрацию.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, охлаждающем и нагревающем пробирки с пробами биоматериала. Нагрев и охлаждение необходимы для проведения репликации. Точность температурного режима влияет на точность результата.

Сферы применения метода

Диагностические возможности метода ПЦР огромны, с его помощью можно выявить самые разные инфекции. Чаще всего ПЦР-метод применяют для диагностики:

  • ВИЧ;
  • герпеса;
  • различных половых инфекций, в частности хламидиоза, уреаплазмоза, гарднереллеза, микоплазмоза и трихомониаза;
  • кандидоза;
  • гепатитов;
  • мононуклеоза;
  • листериоза;
  • цитомегаловируса;
  • туберкулеза;
  • вируса папилломы человека;
  • клещевого энцефалита.

Это далеко не полный список, метод ПЦР-анализа используется в разных областях медицины.

Кстати Метод ПЦР применяется не только в медицинских целях. В наши дни он используется и в иных сферах, например в криминалистике, в тех случаях, когда требуется определить, кому принадлежит найденный на месте преступления биоматериал. ПЦР иногда используется также при установлении отцовства.

Преимущества и недостатки подхода

У диагностики методом ПЦР много плюсов:

Высокая чувствительность. Метод позволяет выявить возбудителя болезни даже при наличии нескольких молекул его ДНК, то есть на очень ранних стадиях, при хронической форме заболевания, а так же в случаях, когда болезнь никак себя не проявляет, протекая латентно.

Универсальность. Для проведения ПЦР анализа подходит почти любой биоматериал — от крови и слюны до клеток кожи.

Широкий охват. Исследование одного образца может выявить сразу нескольких возбудителей болезни.

Оперативность. Результат, как правило, готов через 5–7 часов, то есть получить заключение можно уже на следующий день после забора биоматериала.

Точность. Метод ПЦР практически никогда не дает ложноположительных или ложноотрицательных результатов, если была соблюдена технология проведения этого анализа.

Невысокая стоимость. По цене ПЦР-анализ сравним с любыми другими лабораторными анализами крови.

Однако следует понимать, что совершенных методов анализа не бывает. У ПЦР есть и минус — высокие требования к соблюдению технологии и к профессионализму лаборантов. Если образец был загрязнен, анализ может дать ложный результат. Поэтому проводить ПЦР-диагностику лучше только в самых лучших лабораториях, где внедрены системы контроля качества работы.

Исследуемый биоматериал

Для ПЦР-диагностики заболеваний на анализ берут разные виды биоматериала. Выбор зависит от типа инфекции. При анализе на ЗППП методом ПЦР берут соскоб или мазок из шейки матки или уретры, а также мочу. Для выявления герпеса, цитомегаловируса, гепатита, токсоплазмоза и ВИЧ на анализ берут кровь. При анализе на мононуклеоз и цитомегаловирус берут мазок из зева. Спинномозговая жидкость используется для анализа при поражениях нервной системы, для диагностики внутриутробных инфекций исследуются ткани плаценты, для выявления легочных инфекций — мокрота или плевральная жидкость.

Подготовка к исследованию

Подготовка к ПЦР-диагностике напрямую зависит от типа биоматериала. Кровь сдается натощак утром. Моча также сдается утром, в лабораторных условиях, в стерильный контейнер. Перед сдачей мазка или соскоба из урогенитальной области нельзя вступать в половые контакты за несколько дней до исследования, не следует проводить спринцевания. Мазок или соскоб нельзя сдавать во время менструации и в течение 2-х дней после ее окончания.

Методы ПЦР-диагностики заболеваний

Существует немало различных методик ПЦР-диагностики: ПЦР в реальном времени, секвенирование, пиросеквенирование, микрофлюидные технологии. Сейчас наиболее распространенным способом проведения анализа является ПЦР в реальном времени — этот метод практически не допускает ложноположительных результатов, к тому же срок обработки образцов при исследовании таким способом сокращается — результат можно получить уже через час.

Расшифровка результатов

Для пациента результат ПЦР-анализа может быть либо положительным, либо отрицательным. Отрицательный означает, что следов враждебной ДНК не обнаружено и человек здоров. Положительный подразумевает наличие фрагментов ДНК возбудителя болезни — это значит, что человек заражен и ему требуется лечение.

Нередко ПЦР-диагностика дает положительный результат, но пациент не чувствует никакого недомогания, а признаки болезни отсутствуют. Однако это означает не ошибку, а очень раннюю стадию заболевания. В этом случае необходимы дополнительные исследования и лечение. Если заболевание было диагностировано на столь ранней стадии, следует начинать терапию как можно скорее, ведь чем дальше зайдет болезнь, тем сложнее будет ее вылечить.

ПЦР-диагностика инфекций невероятно точна — она позволяет обнаружить возбудителя болезни, даже если в пробе находится всего одна-единственная молекула его ДНК. Именно это качество сделало ПЦР-анализ одним из эффективнейших диагностических инструментов как для определения наличия инфекции, так и для контроля за ходом лечения.

www.kp.ru

ПЦР: что это такое? Диагностика инфекционных заболеваний методом полимеразной цепной реакции

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

В конце статьи см. словарь Полимеразную цепную реакцию (ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году Кэри Мюллис (американский учёный). Впоследствии он получил за это изобретение Нобелевскую премию. В настоящее время ПЦР-диагностика является, одним из самых точных и чувствительных методов диагностики инфекционных заболеваний. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — экспериментальный метод молекулярной биологии, способ значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе). В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). В результате нарабатываются количества ДНК, достаточные для визуальной детекции. При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце. Кроме простого увеличения числа копий ДНК (этот процесс называется амплификацией), ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с генетическим материалом (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК), и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов.

Специфичность и применение

ПЦР - метод молекулярной диагностики, ставший для ряда инфекций «золотым стандартом», проверен временем и тщательно апробирован клинически. Метод ПЦР позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в пробе присутствует всего несколько молекул ДНК возбудителя.

ПЦР позволяет диагностировать наличие долго растущих возбудителей, не прибегая к трудоёмким микробиологическим методам, что особенно актуально в гинекологии и урологии при диагностике урогенитальных инфекций, передающихся половым путем (ИППП). Также, этим методом проводят диагностику вирусных инфекций, таких как гепатиты, ВИЧ и др. Чувствительность метода значительно превосходит таковую у иммунохомических и микробиологических методов, а принцип метода позволяет диагностировать наличие инфекций со значительной антигенной изменчивостью. Специфичность ПЦР при использовании технологии PCR даже для всех вирусных, хламидийных, микоплазменных, уреаплазменных и большинства других бактериальных инфекций достигает 100%. Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР-диагностика обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно. Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях. Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т. д.). В урологической и гинекологической практике - для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, гарднереллёза, микоплазменной инфекции, ВПЧ - вирусов папилломы человека; в пульмонологии - для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулёза; в гастроэнтерологии - для выявления хеликобактериоза; в клинике инфекционных заболеваний - в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллёза, дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G; в гематологии - для выявления цитомегаловирусной инфекции, онковирусов. Специфичность ПЦР основана на образовании комплементарных комплексов между матрицей и праймерами - короткими синтетическими олигонуклеотидами длиной 18 - 30 букв. Каждый из праймеров сопоставим (комплементарен) с одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка. После соединения (гибридизации) матрицы с праймером (отжиг), последний служит затравкой для ДНК-полимеразы при синтезе комплементарной цепи матрицы.

Проведение ПЦР

Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:

  • ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать;
  • два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента;
  • термостабильная ДНК-полимераза;
  • дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T);
  • ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы;
  • буферный раствор.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1°C. Чтобы избежать испарения реакционной смеси, в пробирку добавляют высококипящее масло, например, вазелиновое. Добавление специфичеких ферментов может увеличить выход ПЦР-реакции. Ход реакции

Обычно при проведении ПЦР выполняется 20 - 35 циклов, каждый из которых состоит из трех стадий. Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94 - 96°C (или до 98°C, если используется особенно термостабильная полимераза) на 0,5 - 2 минуты, чтобы цепи ДНК разошлись. Эта стадия называется денатурацией — разрушаются водородные связи между двумя цепями. Иногда перед первым циклом проводят предварительный прогрев реакционной смеси в течение 2 - 5 минут для полной денатурации матрицы и праймеров.

Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия называется отжигом. Температура отжига зависит от праймеров и обычно выбирается на 4 - 5°С ниже их температуры плавления. Время стадии — 0,5 - 2 минут.

ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это — стадия элонгации. Температура элонгации зависит от полимеразы. Часто используемые полимеразы наиболее активны при 72°C. Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований. После окончания всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длится 10 - 15 мин.

Подготовка материала к исследованию и транспорт его в лабораторию Для успешного проведения анализа важно правильно собрать материал у пациента и правильно провести его подготовку. Известно, что в лабораторной диагностике большинство ошибок (до 70%) совершается именно на этапе пробоподготовки. Для взятия крови в лаборатории ИНВИТРО  в настоящее время применяются вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой - позволяют произвести взятие материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации (загрязнения) материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.

Словарь

ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота - биологический полимер, один из двух типов нуклеиновых кислот, обеспечивающих хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов. Основная роль ДНК в клетках — долговременное хранение информации о структуре РНК и белков.

РНК– рибонуклеиновая кислота - биологический полимер, близкий по своему химическому строению к ДНК. Молекула РНК построена из тех же мономерных звеньев - нуклеотидов, что и ДНК. В природе РНК, как правило, существует в виде одиночной цепочки. У некоторых вирусов РНК является носителем генетической информации. В клетке играет важную роль при передаче информации от ДНК к белку. РНК синтезируется на ДНК-матрице. Процесс этот называется транскрипцией. В ДНК имеются участки, где содержится информация, ответственная за синтез трех видов РНК, различающихся по выполняемым функциям: информационной или матричной РНК (мРНК), рибосомальной (рРНК) и транспортной (тРНК). Все три вида РНК тем или иным способом участвуют в синтезе белка. Однако информация по синтезу белка содержится только в мРНК.

Нуклеоти́ды - основная повторяющаяся единица в молекулах нуклеиновых кислот, продукт химического соединения азотистого основания, пятиуглеродного сахара (пентозы) и одной или нескольких фосфатных групп. Нуклеотиды, представленные в нуклеиновых кислотах, содержат одну фосфатную группу. Они называются по содержащемуся в них азотистому основанию - адениновый (A), содержащий аденин, гуаниновый (G) - гуанин, цитозиновый (C) - цитозин, тиминовый (Т) - тимин, урациловый (U) - урацил. В состав ДНК входят 4 типа нуклеотидов - A, T, G, C, в состав РНК также 4 типа - A, U, G, C. Сахаром в составе всех нуклеотидов ДНК является дезоксирибоза, РНК - рибоза. При образовании нуклеиновых кислот нуклеотиды, связываясь, образуют сахаро-фосфатный остов молекулы, по одну сторону которого находятся основания.

Праймер – котроткая ДНК, используемая для репликации матричной цепи. Каждый из праймеров комплементарен одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка. 

Литература

  1. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ. — М.: Мир, 2002. — 589 с., илл. ISBN 5-03-003328-9
  2. Щелкунов С.Н. Генетическая инженерия — Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2004. — 496 с.; илл. ISBN 5-94087-098-8
  3. Патрушев Л.И. Искусственные генетические системы — М.: Наука, 2005 — В 2 т. — ISBN 5-02-033278-X
  4. http://ru.wikipedia.org/wiki

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

www.invitro.ru

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) диагностика: что это такое

В современном мире существует множество способов обнаружить возбудителей заболеваний на разных этапах развития заболевания. Одним из таких методов является PCR (метод ПЦР или полимеразная цепная реакция), позволяющий выявить инфекцию на самом раннем этапе. Буквально одна единица ДНК или РНК уже могут указать на наличие того или иного возбудителя в организме при должном уровне подготовки пациента и профессионализма лаборантов медицинского учреждения.

ПРЦ-исследование, что это такое?

Анализ на ПЦР заключается в копировании ДНК и РНК возбудителя в лабораторных условиях. Так как основным хранилищем генетической информации является ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота), образованная 2 нитями, соединенными нуклеотидами, именно при множественном копировании (синтезе) этой кислоты можно установить наличие патогенного организма, если речь идет о бактерии.

Бактерии имеют свою собственную оболочку, защищающую их от внешней среды, которая нередко является агрессивной по отношению к последним. У вирусов же нет собственной оболочки (у некоторых представителей имеется нечто похожее на оболочку), а информацию в себе несет не ДНК, а РНК (рибонуклеиновые кислоты).

РНК устроены таким образом, что они встраиваются в цепи ДНК организма-переносчика и меняют их, позволяя проникать в клетки и жить за счет организма. Грубо говоря, бактерии и вирусы оставляют «отпечатки» своими ДНК и РНК, которые и выявляет анализ ПЦР. Эти «отпечатки», как и отпечатки пальцев, являются уникальными для каждого возбудителя. Поэтому ПЦР позволяет выявить заболевание на любых этапах, даже если развитие патогена происходит бессимптомно.

До широкого внедрения ПЦР в гинекологии и урологии на ИППП широко использовались методы:

  • микроскопия — окрашенные и неокрашенные препараты исследуются через микроскоп. Метод очень завязан на опытности лаборанта. Таким методом хорошо выявляются бактерии, имеющие большой размер (гарднереллы, кандиды, трихомонады, гонококки);
  • бактериология — метод заключается в выращивании возбудителей инфекции на питательном агаре, идентификации возбудителя и определения чувствительности его к антибиотикам. Долгое время считался «золотым стандартом». К минусам относят необходимость быстрой доставке материала в КДЛ (клинико-диагностическая лаборатория), сроки выращивания и выяснения чувствительности к группам антибактериальных препаратов (как правило, 5-7 суток);
  • иммуноферментный анализ — Определение антител организма, возникающих в ответ на внедрение антигена возбудителем инфекции. Из плюсов стоит отметить возможность определения стадии заболевания (острая стадия сопровождается наличием IgG в сыворотке крови, хроническая – IgM.) К минусам относится невозможность определения у людей с ослабленным иммунитетом, а также специфичность ИФА. Другими словами, при наличии только результата иммуноферментного анализа, невозможно было выставить диагноз, а можно было только определить, что организм борется с какой-либо инфекцией.

Как происходит сдача анализов на ПЦР

В зависимости от материала, который забирается для проведения анализа ПЦР, существует несколько обязательных правил для пациента. Кровь сдается строго натощак утром. Мочу тоже стоит сдавать утром, первую порцию. Мокрота также сдается натощак, хотя это и необязательно. Мазки сдаются в любое время суток и имеют специфические требования. Мазок из ротоглотки также следует сдавать утром до приема пищи.

Забор материала производится сертифицированным специалистом стерильными одноразовыми инструментами. Берут анализ крови на ПЦР одноразовым стерильным шприцом, из вены забирают приблизительно 1-2 мл венозной крови для выявления таких инфекций как герпес или ВПЧ (вирус папилломы человека). Мочи достаточно 10 мл, мокроты – субстанции, размером со спичечную головку.

Для каждого вида анализа ПЦР существуют свои требования:

  • кровь, как говорилось выше, забирают из вены натощак;
  • мочу следует сдавать утром, первую порцию. Но, если забор является срочным, то достаточно сдать мочу по прошествии 2 часов после последнего мочеиспускания. Это позволит инфекции набрать необходимую критическую массу на 1 мл для более простого обнаружения патогена;
  • как берут соскоб из уретры. Первым делом обрабатывают раствором NaCl 0.9% наружное отверстие уретры. Затем, совершая циркулярные движения, зонд проводят на 2-4 см в уретру. Головку зонда, которая имеет щетинистое строение отсекают и кладут в пробирку со специальным раствором (своеобразный питательный агар для бактерий);
  • из влагалища производят мазок. Предварительно убирают секрет бартолиновых желез, затем из заднего нижнего свода влагалища специальной ватной палочкой происходит забор материала. При видимых патологических изменениях во влагалище мазок следует брать непосредственно на поврежденном участке;
  • как проводят соскоб из цервикального канала у женщин. Удалив слизь из наружных половых путей, зонд на 0,5 – 1,5 см вводят в шейку матки, совершают циркулярное движение и, не касаясь стенок влагалища, удаляют зонд из половых путей. Затем совершают действия, аналогичные соскобу из уретры;
  • из ротоглотки забор происходит натощак. Придерживая кончик языка, зондом производят мазок с задней стенки глотки, по миндалинам или по небным дужкам. Не соприкасаясь со слизистой ротовой полости и зубами, зонд выводится и отправляется на пцр-исследование;
  • из конъюнктивы, предварительно очистив физиологическим раствором гнойные выделения, производят соскоб слизистой нижнего века от латерального к медиальному краю. Веко при этом придерживается медицинским работником во избежание соприкосновения зонда со слизистой глаза и ресницами.

Подготовка к исследованию

Анализ на ПЦР является самым быстрым и достоверным способом на ранних этапах обнаружить инфекцию, но бывают и ложноположительные/ложноотрицательные результаты.

Для сохранения нервной системы как своей, так и сотрудников медицинского учреждения, следует правильно подготовиться к исследованию.

Подготовка к ПЦР у мужчин

Перед исследованием ПЦР мужчинам следует помнить, чего делать нельзя:

  • мочиться за 3 часа до исследования;
  • производить спринцевание и стерильную обработку члена;
  • мыть член мылом, содержащим антибиотик;
  • заниматься сексом за двое суток до ПЦР на ИППП;

Подготовка к ПЦР в гинекологии

Женщинам перед тем как сдать мазок на ПЦР запрещено:

  • при соскобе из уретры запрещено мочиться за 3 часа до исследования;
  • использовать вагинальные растворы с дезинфицирующими свойствами;
  • за двое суток до исследования применять суппозитории для влагалища;
  • использовать антибиотики местно, в том числе и мыло с антибиотиком;
  • занятия сексом за 48 часов до исследования;
  • применять антибиотик внутрь влагалища и уретры;
  • спринцеваться;
  • принимать антибиотики. После последнего приема антибактериального препарата должно пройти не менее 4 недель;
  • сдавать ПЦР во время менструации.

Общие сведения при исследовании мочи для мужчин и женщин

Следует сдать на анализ первую мочу утром, ее среднюю порцию. Другими словами начинать мочиться следует в унитаз. Затем остановить акт мочеиспускания, подставить под уретру баночку для сбора мочи, продолжить мочиться в течении 2-3 секунд, затем снова остановить мочеиспускание и, убрав контейнер, закончить акт мочеиспускания в унитаз.

Женщинам и мужчинам перед тем как сдать ПЦР следует хорошо вымыть наружные половые органы для исключения попадания в мочу смегмы (смесь секрета сальных желез крайней плоти) и выделений из влагалища.

Баночка для мочи должна быть стерильной. Попросите контейнер в клинике, где вы сдаете анализ, либо заранее приготовьте баночку с плотно закрывающейся крышкой и прокипятите их не менее 10 минут.

Непосредственно перед сдачей ПЦР запрещено:

  • мочиться (необходима самая первая порция мочи за день);
  • изменять количество выпитой за сутки до исследования жидкости. Это необходимо, чтобы поддерживать обычный водно-электролитный баланс организма, в котором себя комфортно чувствует потенциальный возбудитель инфекции;
  • использовать уросептики;
  • применять мыло, содержащее в себе антибиотик;
  • заниматься сексом за 12 часов до исследования;
  • при менструации желателен забор мочи уретральным катетером для исключения попадания крови в контейнер с мочой;

Если один из пунктов был нарушен:

Следует воздержаться от проведения диагностики инфекций методом ПЦР. Если же все-таки анализ был сдан, следует его повторить через двое суток. Если при использовании антисептиков и антибиотиков результат оказался «хорошим» – не стоит радоваться. Скорее всего, при наличии определенных жалоб, это ложноположительный результат.

Расшифровка результатов ПЦР

Примерный бланк исследования

Расшифровка анализов ПЦР очень просто (см примерный бланк выше). Существует положительный и отрицательный результаты исследования. Положительный означает, что инфекция в организме есть, но это не должно наводить страх на пациента. Наоборот, это значит, что теперь можно начать лечение и вовремя остановить патоген. Отрицательный результат, соответственно, показывать отсутствие инфекции в организме.

Также не стоит забывать о ложноположительных/ложноотрицательных результатах. В медицине золотым стандартом является три одинаковых результата подряд в независимых клиниках. Стоит помнить, что в разных клиниках сама КДЛ (клинико-диагностическая лаборатория) может быть одна. То есть, здания и названия будут разные, но все анализы отправляются в одну лабораторию, связывающую эти клиники. Поэтому, получив результат в одной клинике, для того, чтобы удостовериться в правильности данного результата, стоит обратиться еще в две клиники и узнать, не сдают ли они результаты в одну и ту же КДЛ.

Широкий спектр исследований

Метод ПЦР относится к группе обширных анализов. С помощью ПЦР анализа можно определить практически любое заболевание. К сожалению, это не самый дешевый метод исследования, поэтому его не назначают всем пациентам поголовно. Цены могут варьироваться в зависимости от клиники и количества исследований.

Существует полимеразная цепная реакция (анализы ПЦР) на 12 инфекций. Какие инфекции входят в ПЦР 12:

  • микоплазмы гениталиум (mycoplasma genitalium) и гоминис (hominis);
  • трихомонады (trichomonas);
  • хламидии (chlamydia trachomatis);
  • уреаплазмы (ureaplasma, включающая ureaplasma parvum (уреаплазмы парвум));
  • кандиды (candida);
  • гарднереллы (gardnerella vaginalis);
  • гонококк (neisseria gonorrhoeae);
  • антитела IgG, IgM;
  • герпеса двух типов.

Также есть упрощенная ПЦР 6 диагностика. Она исключает уреаплазму парвум, кандиды, гонококк, IgG, IgM, герпес обоих типов.

ПЦР исследование на ВИЧ

ПЦР на ВИЧ следует выделить отдельным пунктом, так как тут существует специфический набор ограничений.

Во-первых, ПЦР на ВИЧ определяет не ДНК вируса иммунодефицита человека, а ДНК измененной вирусом клетки-лимфоцита. В нем будет храниться информация о вирусе и размножаться, создавая все больше пораженных лимфоцитов.

Сдавать анализ следует через 14 суток после известного контакта с ВИЧ-инфицированным человеком. Стоит помнить, что заразность этого вируса несколько преувеличена из-за тяжести нелеченного заболевания. Если произошел контакт через кровь, то тут шанс заразиться самый высокий, однако и он не превышает 85%. При остальных контактах вероятность заражения составляет от 1% до 10%.

При исследовании ПЦР на ВИЧ вероятность ложноположительного результата составляет около 2%, если не было нарушений среди медицинского персонала (правильно маркированная пробирка, не перепутали пробирки местами, не было загрязнения материала при вскрытии пробирки).

Длительность ПЦР может составлять от 4 часов до 7 суток, в зависимости от организованности медицинского учреждения, где происходит диагностика инфекций.

Плюсы и минусы ПЦР

При отражении плюсов ПЦР следует отметить:

  • чувствительность. Как говорилось выше, даже единичный агент, оставленный возбудителем, позволяет обнаружить инфекцию на ее ранней стадии или если она протекает скрытно;
  • широкий спектр. Например, ПЦР 6 позволяет 1 исследованием выявить целых 6 возбудителей;
  • точность. Ложные результаты при данном методе исследования имеют место быть, но их количество сведено к минимуму;
  • скорость. Как правило, пациент уже на следующий день может забрать готовый результат ПЦР исследования.

Минусы:

  • стоимость. ПЦР-исследование не включено в список исследований в системе ОМС. Дорогое высокоточное оборудование требует оплаты своей работы;
  • требования к соблюдению техники исследования и к профессионализму сотрудников;
  • требования к подготовке.

Видеозаписи по теме

Интересное

   

tvojajbolit.ru

ПЦР анализ (6, 12): что это такое и как делают, расшифровка, как сдать качественный и количественный вариант исследования

ПЦР — метод полимеразной цепной реакции для обнаружения генетического материала (фрагментов ДНК или РНК) в исследуемом материале. Активно применяется в медицине и науке. Он известен более 30 лет, а сферы его использования постоянно расширяются.

Открытый в 1983 году американским ученым и лауреатом Нобелевской премии Кэри Мюллисом, он стал настоящим прорывом в сфере ранней диагностики инфекционных заболеваний. Дорогостоящий и сложный, однако очень информативный и точный, ПЦР помогает обнаружить в организме человека вирусы и бактерии даже в единичном количестве.

Что это такое?

ПЦР относится к молекулярно-генетическим тестам. Его работа основана на определении фрагментов ДНК и РНК возбудителей инфекции по определенной последовательности нуклеотидов в цепочке. Суть метода состоит в активизации репликации генетического материала бактерии или вируса. Чтобы запустить реакцию, достаточно единичных фрагментов ДНК или РНК патогена.

Анализ проводится в лабораторных условиях. С помощью специальных ферментных систем, специфических для искомой инфекции, ускоряется деление генетического материала патогена — каждый раз удваивается. Цепная реакция включает множество циклов. При каждом из них количество фрагментов нуклеотидных цепочек увеличивается в геометрической прогрессии. По окончании теста маркеров возбудителя становится настолько много, что определить их не составляет сложности.

Получается, если изначально в материале был фрагмент генетического материала вируса или бактерии, который было невозможно обнаружить, после ПЦР количество увеличивается в десятки раз и выявить его просто.

Метод ПЦР считается ультрачувствительным. Он отражает наличие инфекции в организме, даже если заражение состоялось недавно, иммунитет не успел на него отреагировать, а численность инфекционных агентов минимальна.

Бактерии или вирусы вносят изменения в ДНК человека, другими словами, «оставляют отпечатки». Реактивы, используемые при ПЦР, отыскивают их и заставляют многократно делиться. Поэтому установить инфицирование можно всегда, даже если заболевание развивается бессимптомно или возбудитель персистирует в латентном режиме.

ПЦР считается очень специфичным анализом. Ферментные системы нацелены на конкретный антиген и активны только против него. Достоверность метода достигает 100%. Если внутри организма нет малейших признаков искомой инфекции, то бишь, конкретной последовательности нуклеотидов (уникальна для каждого живого существа), исследование не даст положительный результат. Исключения есть, но они сведены к минимуму, поэтому ПЦР признан еще и высокоточным анализом.

Возможность сочетания ферментных систем, определения сразу нескольких видов инфекции, а также вероятность ее обнаружения в абсолютно любой биологической жидкости делает исследование универсальным. Наиболее активно ПЦР применяется в гинекологии и урологии, поскольку здесь распространены заболевания вирусной и бактериальной природы, среди которых, сложно диагностируемые и развивающиеся скрыто.

Что определяет анализ

Примером активного применения ПЦР выступает тест на отцовство. Другие сферы медицины его чаще используют при симптомах инфекционных патологий, повышенном риске их хронизации, высокой вероятности заражения больного опасными для жизни вирусами (гепатит, ВИЧ).

Гинекологи, андрологи и урологи назначают ПЦР на ИППП (Инфекции, Передающиеся Половым Путем), для выявления скрытых заболеваний. Кроме того, с его помощью можно найти признаки онкологического процесса, определенные иммуноглобулины. Все сильнее набирает популярность анализ ПЦР на туберкулез, применяется для обнаружения хеликобактер пилори, как основного провокатора гастрита и язвенной болезни желудка (на ПЦР отправляют кал или желудочное содержимое).

Частные лаборатории предоставляют возможность сделать комплексный скрининг. Можно пройти обследование сразу на 6, 12 инфекций.

Таблица — О каких возбудителях информируют комплексные анализы

С помощью метода выявляют некоторых паразитов (проводят ПЦР на лямблии, описторхов, аскарид), если анализ кала показывает отрицательный результат, несмотря на наличие симптоматики. С его помощью обнаруживают возбудителя гепатитов А, B, C, D, сифилис, Эпштейна-Барра, цитомегало-, папилломавирус.

Общие правила подготовительного периода перед любым анализом ПЦР включают:

  • исключение приема антибиотиков за 3 недели до теста;
  • исключение половых контактов за 2 суток;
  • соблюдение техники сбора материала (при домашней подготовке);
  • применение только стерильной аптечной тары для предоставления проб.

Нюансы зависят от того, какой именно биоматериал будет тестировать лаборатория. Должна сдаваться только та биологическая жидкость, которая вероятнее всего содержит наибольшие концентрации возбудителя. Если это моча, кал, мокрота, слюна, сперма, возможен самостоятельный сбор. Другие типы (мазки из цервикального или уретрального канала, ротоглотки, конъюнктивы) берет медицинский персонал в условиях медицинского учреждения.

Кровь

Забор проводит лаборант одноразовой вакуумной системой или шприцем. Для тестирования достаточно 1‒2 мл. Биоматериал собирают с утра, натощак. Специфических условий подготовки нет, как и потребности снижения физических нагрузок, исключения каких-либо продуктов накануне. Единственное требование — должно пройти достаточно времени после антибиотикотерапии.

Моча

Чаще всего изучается при подозрениях на резистентные к лечению инфекции мочевыводящих органов. Биоматериал — утренняя урина, собранная вскоре после пробуждения, перед завтраком. Для доставки пробы используют стерильный контейнер с крышкой, приобретенный в аптеке или выданный лабораторией. Собирают только среднюю порцию (первую и последнюю спускают в унитаз). Сразу закрывают, транспортируют для анализа на протяжении 2 часов.

Накануне не желательно принимать диуретики или увеличивать обычный суточный объем жидкости. Женщинам нельзя спринцеваться за 3 суток. За 2 дня представители обоих полов должны отказаться от секса. Перед анализом нельзя принимать нефропротекторы с растительным составом, уроантисептики. Перед сбором мочи нужно не забыть подмыться, чтобы бактерии с наружных половых органов не попали в биоматериал.

Мазок из уретры

Забор делают в лаборатории или поликлинике. Наружное отверстие уретры очищают от выделений с помощью физраствора. Специальную щетку со щетинистой головкой погружают на 2‒4 см в уретральный канал, делают циркулярное движение, извлекают приспособление и основную контактирующую часть срезают в пробирку со специальным раствором (выступает своеобразной питательной средой).

Непосредственно перед анализом за 3 часа нельзя мочиться. Запрещается проводить гигиенические процедуры с использованием антисептиков или антибактериальных растворов. Нельзя спринцеваться и заниматься сексом за 2 суток до диагностики.

Гинекологические мазки

Проводятся в лаборатории. Женщина занимает положение в гинекологическом кресле. Лаборант или врач с помощью физраствора убирает слизь и выделения бартолиновых желез снаружи половых органов. Если необходим мазок из влагалища, специальным зондом со щетинистой головкой делают циркулярное движение в нижней части заднего свода. Рабочую часть устройства срезают в пробирку с раствором. При заборе из цервикального канала зонд погружают вглубь шейки до 1,5 см.

ПЦР влагалищного мазка часто назначают беременным женщинам, при симптомах ИППП или повышенном риске их хронизации, а также при поисках причин бесплодия. Перед анализом нельзя иметь интимные связи, спринцеваться, использовать антисептики для подмываний или свечи с антибактериальным действием.

Мазок из ротоглотки

Берет лаборант или врач. Головкой зонда проводят по задней стенке глотки, миндалинам, небным сводам, которую затем срезают в пробирку. Анализ берут строго натощак. Перед ним нельзя использовать антибактериальные спреи или леденцы.

Другие материалы

Для выявления возбудителя туберкулеза анализируют мокроту, которую больной собирает с утра с помощью стерильного контейнера (подходит также для ПЦР слюны). Кал также сдают в специальной емкости, причем нет смысла наполнять ее. Достаточно просто взять небольшую пробу ложкой, которой укомплектован стерильный сосуд.

Забор мазка из конъюнктивы проводит лаборант, снимая образец с поверхности нижнего века. Содержимое желудка получают аспирационным путем, при гастроскопии. На анализ могут отправить массы, или биоптат со стенки органа.

Виды и результаты ПЦР

Полимеразная цепная реакция способна отразить не только наличие возбудителя, но также его примерную концентрацию в единице биоматериала (например, 1 мл крови, мочи, слюны). Выявление, а также идентификация бактерий либо вируса называется качественным ПЦР-анализом. Он может дать только 2 варианта ответа — есть возбудитель в организме или нет.

Это уместно для диагностики заболеваний даже на ранних сроках после заражения. С помощью ПЦР можно проверить наличие инфекции в крови в инкубационном периоде развития или во время «серологического окна» (когда иммунитет еще не выработал антитела, а ИФА-тест отражает отрицательный результат, несмотря на высокую вероятность заражения). Нормой по всем возбудителям считается отрицательный результат. Если он положительный — в организме есть инфекция.

Чтобы оценить концентрацию болезнетворных агентов, проводят количественные ПЦР анализы. Они указывают, сколько именно копий РНК или ДНК возбудителя обнаружено в расчете на единицу измерения биоматериала. Результат указывают в международных единицах (МЕ/мл). Количественный тест определяет:

  • вирусную или бактериологическую нагрузку на организм;
  • степень активности инфекции;
  • необходимость начала терапии;
  • эффективность назначенного лечения.

Качественный и количественный ПЦР одинаково важны при диагностике и лечении ВПЧ, ВИЧ, гепатита С. При перечисленных заболеваниях назначают мощные противовирусные препараты, а контроль изменения концентрации возбудителя позволяет корректировать дозы, снижая риск развития побочных эффектов. Хорошим анализом считается такой, результат которого приближен к минимальному порогу чувствительности теста (10-50 МЕ/мл), однако это не исключает необходимости продолжать терапию.

Информативность ПЦР анализа и его точность актуальны при диагностике многих заболеваний. Однако метод этот сложный, а его выполнение требует строгого соблюдения техники и правил. В противном случае возможно получение не достоверного результата (ложного). Ложноположительные данные получаются при:

  • попадании в пробу соскоба крови;
  • загрязнениями биоматериала примесями эпителия и слизи;
  • нарушении стерильности условий проведения анализа.

Ложноотрицательный результат теста возможен при неправильной транспортировке проб в лабораторию (нарушения температурного режима, воздействие внешних условий), применении непригодных для анализа реактивов.

Это интересно!

Один из разновидностей ПЦР анализа — ПЦР real-time. Особенностью исследования является более тщательное изучение и дифференциация материала, потенциально относящегося к патологическому. Удобнее объяснить разницу на примерах.

После лечения какой-то инфекции антибиотиками в организме человека еще некоторое время будут находиться остатки патогенов (их клеточные стенки, части РНК или ДНК). Проведение обычной ПЦР сразу после лечения также даст положительный результат, но инфекции как таковой уже нет. Именно поэтому для достоверности анализа рекомендуется соблюдать интервал после терапии антибиотиками минимум в три недели.

Выполнение ПЦР real-time сразу после лечения даже при наличии фрагментов патогенов, но при отсутствии активных форм, даст отрицательный результат. То есть это более чувствительный анализ, который лишен мельчайших недостатков.

Часто задаваемые вопросы

Вопрос: Где лучше сдавать анализ, в частной или государственной лаборатории?

Ответ: Проходить исследование следует в крупных и известных медицинских учреждениях. Как правило, они располагают наиболее современным и высокоточным оборудованием, качественными реактивами. Это повышает информативность теста и его точность. Кроме того, частные лаборатории обеспечивают пациентов расходниками, необходимыми для правильной доставки проб.

Вопрос: Сдавать мазок из уретры больно или нет? Все знакомые говорят по-разному.

Ответ: Ощущения сугубо субъективные. Как правило, женщины переносят процедуру легко. Мужчины испытывают дискомфорт, что спровоцировано анатомическими особенностями строения уретры. Задача лаборанта — не допустить попадание крови в образец, поэтому нужно быть готовым к незначительным и кратковременным неприятным ощущениям.

Вопрос: Сколько делается комплексный анализ ПЦР? Можно ли попросить сделать тест срочно?

Ответ: Продолжительность проведения анализа варьируется от 5 до 8 часов. Процесс обработки результатов может занять несколько больше времени. Рассчитывать на результат можно спустя 1‒2 суток. Крупные, оснащенные по последнему слову техники лаборатории могут предоставить протокол исследования через несколько часов. Вопрос срочности следует решать индивидуально.

Вопрос: Можно ли сдавать полимеразную цепную реакцию вместо пробы Манту? Например, собирая ребенка в детский сад?

Ответ: Возможность замены тестов следует обсуждать с руководством заведения. Некоторые детсады и школы действительно разрешают приносить результаты ПЦР на туберкулез родителям, которые не хотят делать своим детям Манту. Однако нужно учитывать, что достоверность анализа относительно микобактерий туберкулеза несколько снижена, что обусловлено различными концентрациями возбудителя в биологических средах организма. Чтобы получить точный результат, следует сдавать на ПЦР мазок из зева, мокроту либо мочу.

Вопрос: Почему ИФА показывает положительный результат, а ПЦР — отрицательный?

Ответ: Иммуноферментный анализ направлен на поиск в крови антител к специфическим антигенам инфекций. Метод отражает не только сам факт заражения, но и реакцию иммунитета на этот процесс. ПЦР ищет непосредственно возбудителя. ИФА будет положительным еще некоторое время после лечения антибиотиками, тогда как ПЦР покажет отсутствие инфекции в крови. Кроме того, на похожие антигены могут вырабатываться сходные антитела, что также обуславливает позитивный результат ИФА при негативном тесте ПЦР. Редко для дополнения теста ИФА приходится сдавать бакпосев.

Выводы

ПЦР — универсальный, точный, специфичный и информативный способ диагностики инфекционных заболеваний. Его используют для раннего обнаружения опасных бактерий и вирусов в организме. Референтное значение результата анализа — «отрицательный» относительно всех искомых возбудителей. Тест назначают для идентификации провокатора заболевания и правильного подбора терапии. ПЦР применяется и в процессе лечения, для определения вирусной нагрузки.

cc-t1.ru

Что такое ПЦР анализ?

ПЦР анализ, что это такое знают не многие, хотя сегодня это один из инновационных методов диагностики инфекционных заболеваний, за который его разработчик 1993 году получил Нобелевскую премию. Этот высокотехнологический метод позволяет обнаружить серьезные заболевания на начальной стадии и своевременно начать их лечение.

Суть методики и сфера применения

Анализ основан на принципах молекулярной биологии. Исследование методом ПЦР заключается в использовании особого фермента, что под воздействием температурных режимов, копирует РНК и ДНК присутствующих в собранном биоматериале бактерий и вирусов. Такое массовое размножение дает возможность врачу в точности определить, к какому виду принадлежит бактерия, спровоцировавшая недуг, а также измерить уровень ее концентрации в биоматериале. Проводится процедура копирования в специальном аппарате – амплификаторе, который нагревает и охлаждает пробирки с собранным материалом, создавая удобное условия для репликации.

ПЦР исследование проводят по многим причинам, но чаще всего его используют для определения наличия таких инфекционных болезней как:

  • ВИЧ;
  • герпес;
  • половых инфекции — хламидиоз, уреаплазмоз, гарднереллез, трихомониаз;
  • кандидоз;
  • гепатит;
  • мононуклеоз;
  • листериоз;
  • цитомегаловирус;
  • туберкулез;
  • вируса папилломы человека;
  • клещевой энцефалит.

ПЦР анализ не ограничивается сферой применения в медицине, не редко скрининг делают, если необходимо понять, кому принадлежит биологический материал, найденный на месте преступления, то есть ПЦР анализ массово применяют в криминалистике. Требуется отметить, что мазок или кровь на ПЦР берут, если требуется установить отцовство. Результаты ПЦР диагностики ничем не уступают привычному анализу на ДНК родство, да и стоит намного дешевле.

Что показывает при беременности общий анализ крови?32957

Особенности диагностики

Анализ методом ПЦР обладает огромным количеством положительных сторон. В первую очередь, важно отметить чувствительность теста. ПЦР анализатор способен определить молекулы ДНК бактерий даже при их малом количестве, то есть врач получает информацию о ранней стадии заболевания или начале хронической формы недуга. Анализ крови ПЦР способен даже определить наличие инфекционного заболевания, что находится в латентной форме и ничем себя не выдает.

Требуется отметить, что анализ ПЦР у мужчин и у женщин может быть проведен при наличии любого типа материала, это не обязательно должна быть кровь или мазок, подойдет слюна, клетки кожи и даже моча.

Результаты анализов ПЦР могут быть обширными, так как ПЦР диагностика инфекций может отхватить сразу несколько возбудителей заболеваний, что находятся в одном образце биоматериала. Обследование можно пройти в любое удобное время, что показывает анализ человек может узнать за короткий промежуток времени, так как результаты диагностики биоматериала готовы уже через 5 часов.

Все врачи сходятся во мнении, что анализ крови на ПЦР или другого материала никогда не дает ложные результаты, если правильно соблюдена методика проведения диагностики. ПЦР положительный или ПЦР отрицательный может быть ложным, только при условиях, что лабораторные сотрудники не обладают высоким уровнем профессионализма. Если изъятый биоматериал был загрязнен или его неправильно хранили, то расшифровка анализа ПЦР может иметь искаженные результаты.

Подготовка к проведению диагностики

Мазок на ПЦР у женщин из шейки матки берут, если требуется определить заболевания, передающиеся половым путем, к примеру, хламидии, уреаплазымы или герпес. Если ПЦР требуется провести на эти бактерии мужчине, то у него берется выделение из уретры — сок простаты, проще говоря. Кровь методом ПЦР исследуют, если хотят определить гепатит, токсоплазмоз и ВИЧ. Делается анализ ПЦР на мононуклеоз и цитомегаловирус путем изъятия мазка из зева. Полимеразную цепную реакцию на наличие легочных инфекций проводят с наличием такого биоматериала, как мокрота или плевральная жидкость.

ПЦР при беременности делают, если есть подозрение на наличие внутриутробных инфекций, а также болезней и патологий нервной системы плода. В качестве биоматериала для исследования берут у беременной ткани плаценты. Если у человека поражение нервной системы, исследуют спинномозговую жидкость. Для определения такой бактерии как хеликобактер пилори, используют биоптаты желудка и двенадцатиперстной кишки.

Анализ мочи ПЦР тоже используется нередко, но он менее предпочтителен нежели анализ крови. Он позволяет увидеть наличие патогенных микроорганизмов, что провоцируют инфекционные заболевания, но не может указать точное их количество и степень развития недуга. ПЦР мочи используют, если нет возможности по каким-то причинам изъять кровь или сделать мазок. Также требуется отметить, что ПЦР мочи может проводиться для исследования инфекций у маленьких детей. Анализ мочи позволяет также определить наличие инфекции и воспаления в мочевом пузыре, определить камни, песок, а также цистит и уретрит.

Многие даже не догадываются, что сделать анализ можно с помощью кала, конечно показывает этот тип исследования исключительно наличие паразитов в организме, а также наличие яиц, что остались после выведения взрослой колонии. Анализ кала покажет, сколько именно есть глистов в образце, это позволит определить степень поражения организма. А также врач сможет подобрать препарат, чувствительный к выявленному штамму паразита.

Как уже выше упоминалось, сдать анализ на ПЦР можно при наличии любого биоматериала. ПЦР анализ, что это такое, вам известно, требуется знать еще и подготовку к диагностике. От того, что предстоит изъять, напрямую зависит подготовка, к примеру, сдавать мочу нужно после тщательной гигиены половых органов в утреннее время. Кровь сдают натощак, во время сдачи вернее, накануне, необходимо отказаться от употребления любых медикаментозных препаратов. Если имеются хронические недуги, то список разрешенных препаратов для употребления решается индивидуально, лечащим доктором.

Анализ кала сдают в утреннее время после тщательной подготовки. Накануне сдачи, необходимо отказаться от тяжелой пищи и провести тщательную гигиену половых органов. Анализ кала будет недостоверным, если биоматериал был изъят с помощью клизмы, необходимо естественное нисхождение материала. Подготовка к сдаче слюны не требуется, достаточно оказаться от курения, употребления цитрусового сока.

Перед сдачей биоматериала на определение заболеваний, что передаются при сексе, пациентам требуется исключить половые контакт за два дня до ПЦР диагностики. Женщинам сдавать мазок из шейки матки запрещено во время критических дней через два дня после месячных, иначе ПЦР расшифровка будет иметь искаженные сведения.

Результаты скрининга

Детально объяснить, что такое анализ ПЦР говорит о состоянии того или иного пациента, может исключительно квалифицированный врач, самостоятельно понять данные, указанные в бланке, будет непросто. Если вы попросите доктора-расшифруйте данные, то он в первую очередь скажет, положительный результат или негативный. Если анализ негативный — значит человек здоров, и никаких бактерий в исследуемом материале не обнаружено. В случае с положительным результатом, указывается точный тип возбудителя и его количество, можно узнать также точный период, когда было заражение по наличию определенных иммуноглобулинов.

Какие существуют анализы крови?1747

Существует несколько классов иммуноглобулинов, что могут четко отобразить состояние пациента:

  1. IgG развиваются в крови поле 4 недель заражения и могут сохраняться в крови до нескольких лет. Они не всегда являются показателями бактерий, порой они ступают в качестве памяти организма о том, что когда-то он сталкивался с подобным типом возбудителя.
  2. IgM — появляются в самом начале после заражения. Как правило, они видны уже на 5 сутки, это первые защитники организма, что атакуют бактерию. Они исчезают из результата крови через две недели. Если они присутствуют в анализе крови, то можно предположить, что заражение произошло совсем недавно, примерно неделю назад.
  3. IgA сигнализируют об остром развитии бактериальной инфекции в организме или же об рецидивирующей стадии хронического недуга.

Есть ряд случаев, когда анализ показывает положительный результат, но человек и вовсе не чувствует себя плохо. Это вовсе не говорит об ошибки проведения диагностики, скорей имеет место хроническая форма недуга, которая находится в спящем состоянии или же развитие болезни только начинается. В это время нет достаточного количества бактерий, что могут спровоцировать симптоматику.

Теперь принцип анализа вам известен, и вы сможете обратиться за данной диагностикой, если появится наименьшее подозрение на инфекционное заболевание. От того, насколько быстро вы пройдете диагностику, которая является практически безболезненной, напрямую зависит длительность дальнейшего лечения и его эффективность. Чтобы постоянно поддерживать свое здоровье на хорошем уровне, рекомендовано раз в году проходить профилактическую ПЦР диагностику на наличие ЗПП, а также инфекций других органов. Лучше предупредить заболевание, чем потом бороться с его последствиями.

1diagnos.ru

Анализ крови на ПЦР – что это такое, суть метода, показания к назначению, расшифровка анализа крови ПЦР

Диагностика инфекционных заболеваний – бактериальных и вирусных – направлена на раннее выявление возбудителей, что позволяет назначать раннюю и максимально эффективную терапию. Самым современным способом диагностики инфекций является ПЦР или полимеразная цепная реакция. Так что же это за метод, и для чего он нужен?

Суть полимеразной реакции

Любой микроорганизм и вирус содержат в своей структуре молекулы ДНК или РНК. У каждого из них эти соединения уникальны, поэтому, если выделить в анализе крови у детей или взрослых нуклеиновые кислоты, можно с абсолютной точностью поставить диагноз.

К сожалению, концентрация ДНК в образцах крови или других биологических материалах достаточно низка и с помощью обычных методов диагностики определить ее не получается. Чтобы справиться с этой проблемой, была изобретена полимеразная цепная реакция.

Сущность ПЦР заключается в специальной обработке образца крови, в результате чего в ней увеличивается концентрация ДНК молекул, определение типа которых в дальнейшем позволяет установить вид возбудителя и поставить диагноз.

Как сдать кровь на ПЦР

При подготовке к анализу следует придерживаться общих рекомендаций: не пить и не есть непосредственно перед анализом крови. Хотя для сдачи крови на ПЦР можно так строго не придерживаться этих требований, так как точность исследования не зависит от того, на сытый или голодный желудок был взят анализ.

Какие заболевания можно выявить с помощью ПЦР

С помощью ПЦР можно выявить практически любые вирусные и бактериальные заболевания. Для анализа используется не только кровь, но и другие биологические материалы: сперма, слюна, мазки из уретры и с шейки матки. Анализ крови будет информативен в том случае, если возбудитель конкретного заболевания проникает в кровь человека. Поэтому ПЦР крови назначают при следующих заболеваниях:

  • вирусные гепатиты А, В, С, D и TT;
  • цитомегаловирус;
  • герпетическая инфекция (вирусы герпеса 1, 2 и 4-го типов);
  • ВИЧ-инфекция
  • энтеровирусная инфекция;
  • опоясывающий лишай;
  • краснуха;
  • токсоплазмоз;
  • инфекционный мононуклеоз;
  • листериоз.

Если же взять во внимание возможность проведения ПЦР других биоматериалов, то в список заболеваний, выявляемых с помощью ПЦР, следует добавить:

Особо актуально в настоящее время ПЦР анализа крови беременной на так называемые TORCH-инфекции: цитомегаловирус, токсоплазмоз, краснуху и герпесвирусную инфекцию. Связано это с тем, что упомянутые заболевания могут привести к аномалиям развития плода.

Преимущества ПЦР

  1. 100% точность диагностики – если в крови есть даже несколько фрагментов ДНК возбудителя, с помощью ПЦР они буду выявлены, и будет поставлен точный диагноз. Это главное отличие данного метода от других способов диагностики – ИФА, общего анализа крови и прочих.
  2. Специфичность. При проведении ПЦР отсутствует такое понятие, как ложноположительный или ложноотрицательный результат. В отличие от иммуноферментного анализа (ИФА).
  3. Возможность проведения анализа сразу на несколько возбудителей из одного образца биоматериала, что делает метод удобным для пациента – не нужно несколько раз сдавать анализ.
  4. Быстрота. Не нужно выделять и выращивать возбудителя на питательных средах, как это делается при бактериологическом исследовании. Результат может быть готов уже в день сдачи анализа.
  5. С помощью ПЦР выявляют возбудителей латентных заболеваний, когда возбудитель в организме есть, но он еще не вызвал заболевание, или когда пациент является носителем инфекции (гепатита или ВИЧ).
  6. Низкая стоимость. Цена анализа ПЦР на одного возбудителя составляет 250-500 рублей. Чуть дороже стоит полуколичественный анализ на вирусы – около 1000 рублей.

Недостатки анализа

ПЦР является высокотехнологичным методом исследованием и предъявляет высокие требования к оснащению лаборатории. Помещение, где делают анализ, обязательно должно быть оснащено фильтром биологической очистки, так как в воздухе постоянно присутствуют частицы кожи, слюны, содержащие в своем составе молекулы ДНК. Несоблюдение техники работы с биоматериалами может стать причиной неверного результата.

Анализ крови – расшифровка у взрослых (ПЦР)

Трактовка результатов этого исследования не представляет сложностей, потому что отсутствует таблица норм анализа крови на ПЦР. В бланке результатов могут фигурировать лишь две фразы:

  • отрицательный результат – возбудитель, на который проводился анализ, не выявлен;
  • положительный результат – в организме имеется возбудитель указанного заболевания.

Следует знать, что ПЦР может быть положительной даже при отсутствии клинических симптомов заболевания! Расшифровка анализа крови на ПЦР у детей не отличается от таковой у взрослых.

Кому нужно сдать анализ на ПЦР

Любой человек может сдать кровь для исследования. Прямым показанием для исследования является подозрение на инфекции передающиеся половым путем (хламидиоз, гарднереллез, ВИЧ-инфекция). При случайном незащищенный половом контакте только ПЦР поможет поставить диагноз на ранней стадии, если человек заразился каким-либо заболеванием. В обязательном порядке кровь на TORCH-комплекс сдают беременные женщины. А также женщины, только планирующие беременность.

Хотя ПЦР является максимально эффективным методом диагностики, зацикливаться только на нем не стоит. Обследование пациента при любом заболеваний должно носить комплексный подход. Если цепная полимеразная реакция позволяет выявить возбудителя, то серологическое исследование позволяет оценить эффективность лечения, реакцию организма на возбудителя и лекарства. Назначать все исследования должен врач по показаниям.

Увидеть, как выполняется анализ крови ПЦР,  вы сможете, просмотрев данный видео-обзор:

Гудков Роман, врач-реаниматолог

41,010 просмотров всего, 3 просмотров сегодня

(67 голос., средний: 4,27 из 5) Загрузка...

okeydoc.ru


Смотрите также